Protein dapat diendapkan dengan asam tannat. Kompleks asam tannat/protein yang terjadi dapat bereaksi dengan ion Ferri membentuk kompleks stabil berwarna merah. Sebelumnya, kelebihan asam tannat harus dihilangkan dengan pencucian menggunakan larutan NaCl fisiologis. Metode ini mempunyai kelebihan: cepat, mudah dikerjakan, dan akurat. Metode ini bisa memiliki batas deteksinya hingga 5 ug/mL, dan recovery 98-103%. Interferensi yang bisa terjadi pada metode ini adalah bila terdapat senyawa yang bisa membentuk kompleks dengan ion Ferri.

Reagen:

  • Larutan NaCl 1.5 M
  • Asam Tannat 1 mM; dibuat dengan melarutkan 1.7 g asam tannat dalam akuades (yang mengandung 1 g asam benzoat) hingga 1 L.
  • Larutan FeCl3 10 mM; dibuat dengan melarutkan 1.625 g dalam pelarut air-trietanolamin (1:1) hingga 1 L.

Larutan Standard:

    Buat seri kadar larutan standard BSA (Bovine Saline Albumin) 0.1 – 1.0 mg/mL dengan pengenceran dari larutan stok.

Prosedur:

  1. Ambil 0.5 mL larutan (sampel protein/standard), masukkan ke dalam tabung sentrifuse. Tambahkan 0.5 mL larutan NaCl 1.5 M dan 0.5 mL asam tannat 1 mM, vortex. Setelah 5 menit, lakukan sentrifugasi selama 10 menit pada 3000 rpm.
  2. Dekantir supernatan, tuntaskan dengan membalikkan tabung pada kertas saring.
  3. Tambahkan 5 mL larutan NaCl pada endapan, vortex, sentrifugasi, dan buang supernatan untuk memcuci endapan.
  4. Tambahkan 2 mL air dan 0.5 mL reagen FeCl3 pada endapan, vortex. Setelah 5 menit, ukur absorbansinya pada 510 nm terhadap blanko (2 mL air + 0.5 mL FeCl3).

Referensi:

    Yatzidis, H., 1977, New Colorimetric Method for Quantitative Determination of Protein in Urine, Clin. Chem., 23 (5): 811-812

IN ENGLISH

Proteins can be precipitated by acid tannat. Complex tannat acid / protein occurs Ferric ions can react with to form a stable complex is red. Earlier, the excess acid must be removed by washing tannat using physiological NaCl solution. This method has advantages: quick, easy to do, and accurate. This method can have a limit of detection up to 5 ug / mL, and 98-103% recovery. Interference that can occur in this method is that if there are compounds that can form complexes with ions Ferri.

Reagents:

* 1.5 m NaCl solution
* Acid Tannat 1 mM; prepared by dissolving 1.7 g tannat acid in distilled water (containing 1 g of benzoic acid) up to 1 L.
* 10 mM solution of FeCl3; prepared by dissolving 1625 g of solvent water-triethanolamine (1:1) up to 1 L.

Standard solution:

Create a series of standard solution concentration BSA (Bovine Albumin Saline) 0.1 – 1.0 mg / mL by dilution from stock solution.

Procedure:

1. Take 0.5 mL of solution (protein sample / standard), enter into a centrifuge tube. Add 0.5 mL of NaCl 1.5 m and 0.5 mL of 1 mM tannat acid, vortex. After five minutes, do centrifugation for 10 minutes at 3000 rpm.
2. Dekantir supernatant, complete with turning the tube on filter paper.
3. Add 5 mL of NaCl solution on the deposition, vortex, centrifugation, and discard the supernatant to precipitate memcuci.
Fourth. Add 2 mL of reagent water and 0.5 mL of FeCl3 on the sediment, vortex. After five minutes, measure the absorbance at 510 nm against blank (2 mL water + 0.5 mL FeCl3).

Reference:

Yatzidis, H., 1977, New colorimetric Method for Quantitative Determination of Protein in urine, Clin. Chem., 23 (5): 811-812Sumbangkan terjemahan yang lebih ba

About Khamir_Yeast

Pengajar dan Penulis Independen, Penyayang Kucing, Karakter : Humoris tapi Gampang Tersinggung, Agak temperamental dan cepat emosi, Cepat memaafkan, Lebih suka menganalisa sebelum berkomentar, Bersahabat tapi gak suka dengan orang yang Lebay. Suka makanan yang pedas. Hobi melukis, berenang, dan memasak. Moto Hidup : BATU saja bisa PECAH apalagi MASALAH ....

Leave a Reply

Fill in your details below or click an icon to log in:

WordPress.com Logo

You are commenting using your WordPress.com account. Log Out / Change )

Twitter picture

You are commenting using your Twitter account. Log Out / Change )

Facebook photo

You are commenting using your Facebook account. Log Out / Change )

Google+ photo

You are commenting using your Google+ account. Log Out / Change )

Connecting to %s